實驗室36種微生物培養(yǎng)基配制方法
常用的微生物培養(yǎng)基及配制方法
1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于細菌培養(yǎng)）
牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。
2.高氏1號培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng))
可溶性淀粉20g，KNO? 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4?3H2O 0.5g，MgSO4?7H2O0.5g，F(xiàn)eSO4?7H2O0.01g?水1000mL?pH7.4～7.6。配制時注意：可溶性淀粉要先用冷水調勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。
3.馬丁氏（Martin）培養(yǎng)基（用于從土壤中分離真菌）
K2HPO 41g，MgSO4?7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，1/3000孟加拉紅水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃濕熱滅菌30min。待培養(yǎng)基融化后冷卻55～60℃時加入鏈霉素(鏈霉素含量為30μg/mL)。
4.馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng))
馬鈴薯(去皮) 200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下：
將馬鈴署去皮，切成約2cm?的小塊，放入1500mL的燒杯中煮沸30min，注意用玻棒攪拌以防糊底，然后用雙層紗布過濾，取其濾液加糖，再補足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng))
蔗糖 30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4?7H2O 0.5g，KCl 0.5g，F(xiàn)eSO4?7H2O 0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。
6.Hayflik培養(yǎng)基(用于支原體培養(yǎng))
牛心消化液(或浸出液) 1000mL，蛋白胨 10g，NaCl 5g，瓊脂 15g，pH7.8～8.0，分裝每瓶 70mL，121℃濕熱滅菌15min，待冷卻至80℃左右，每70mL中加入馬血清20mL，25%鮮酵母浸出液 10mL，15醋酸鉈水溶液2.5mL，青霉素G鉀鹽水溶液(20萬單位以上) 0.5mL，以上混合后傾注平板。
*注意：醋酸鉈是極毒的藥品，需特別注意安全操作。
7.麥氏(McCLary)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基)
葡萄糖0.1g，KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸鈉0.82g，瓊脂l.5g，蒸餾水100mL。溶解后分裝試管，1l5℃濕熱滅菌15min。
8.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基(用于V.P.反應和甲基紅試驗)
蛋白胨 0.5g，葡萄糖 0.5g，K2HPO4 0.2g，水 100mL，pH 7.2，1l5℃濕熱滅菌20min。
9.蛋白胨水培養(yǎng)基(用于吲哚試驗)
蛋白胨 10g，NaCl 5g，水 1000mL，pH7.2～7.4，121℃濕熱滅菌20min。
10.糖發(fā)酵培養(yǎng)基(用于細菌糖發(fā)酵試驗)
蛋白胨 0.2g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.02g，水 100mL，溴麝香草酚藍(1%水溶液) 0.3mL，糖類 1g。分別稱取蛋白胨和NaCl溶于熱水中，調pH至7.4，再加入溴麝香草酚藍(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖類，分裝試管，裝量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管內充滿培養(yǎng)液)。115℃濕熱滅菌20min。滅菌時注意適當延長煮沸時間，盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內不殘存氣泡。常用的糖類，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)。
11.RCM培養(yǎng)基(強化梭菌培養(yǎng)基)、(用于厭氧菌培養(yǎng))
酵母膏 3g，牛肉膏 10g，蛋白胨10g，可溶性淀粉1 g，葡萄糖5 g, 半胱氨酸鹽酸鹽 0.5g，NaCl 3g，NaAc 河南健源高效堂骨痛康 3g，水l000mL，pH8.5，刃天青3mg/L，l21℃濕熱滅菌30min。
12.TYA培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))
葡萄糖 40g，牛肉膏 2g，酵母膏 2g，胰蛋白胨(bacto-typetone) 6g，醋酸銨3g，KH2PO4 0.5g，MgSO4?7H2O0.2g，F(xiàn)eSO4?7H2O0.01g，水1000mL， pH6.5，121℃濕熱滅菌30min。
13.玉米醪培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))
玉米粉 65g，自來水1000mL，混勻，煮10min成糊狀，自然pH，121℃濕熱滅菌30min。
14.中性紅培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))
葡萄糖 40g，胰蛋白胨 6g，酵母膏 2g，牛肉膏 2g，醋酸銨 3g，KH2PO4 5g，中性紅 0.2g，MgSO4?7H?O 0.2g，F(xiàn)eSO4?7H?O 0.01g，水1000mL，pH6.2，121℃濕熱滅菌30min。
15.CaCO3明膠麥芽汁培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))
麥芽汁(6波美) 1000mL，水 1000mL，CaCO3 10g，明膠 10g，pH6.8，121℃濕熱滅菌30min。
16.BCG牛乳培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)
(A)溶液：脫脂乳粉 100g，水 500mL，加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液 1mL，80℃滅菌20min。
(B)溶液：酵母膏 10g，水 500mL，瓊脂 20g，pH6.8，121℃濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將(A)、(B)溶液混合均勻后倒平板。
17.乳酸菌培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)
牛肉膏 5g，酵母膏 5g，蛋白胨 10g，葡萄糖 10g，乳糖 5g，NaCl 5g，水 1000mL，pH6.8，121℃濕熱滅菌20min。
18.酒精發(fā)酵培養(yǎng)基(用于酒精發(fā)酵)
蔗糖 10g，MgSO4?7H2O 0.5g，NH4NO3 0.5g，20%豆芽汁 2mL，KH2PO4 0.5g，水 100mL，自然pH。
19.柯索夫培養(yǎng)基高效骨痛康治痛風嗎(用于鉤端螺旋體培養(yǎng))
優(yōu)質蛋白胨 0.4 g，NaCl 0.7g，KCl 0.02g，NaHCO3 0.01g，CaCl 0.02g，KH2PO4 0.09g，NaH2PO4 0.48g，蒸餾水500mL，無菌兔血清40mL。
制法：除兔血清外的其余各成分混合，加熱溶解，調pH至7.2，121℃濕熱滅菌20min，待冷卻后，加入無菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分裝試管（5～10mL/管），56℃水浴滅活1h后備用。
20.豆芽汁培養(yǎng)基
黃豆芽 500g，加水 1000mL，煮沸 1h，過濾后補足水分，121℃濕熱滅菌后存放備用，此即為50%的豆芽汁；
用于細菌培養(yǎng)：10%豆芽汁 200mL，葡萄糖(或蔗糖) 50g，水 800mL，pH7.2～7.4。
用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)：10%豆芽汁 200mL，糖 50g，水 800mL，自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
21.LB(Luria—Bertani)培養(yǎng)基(細菌培養(yǎng)，常在分子生物學中應用)
雙蒸餾水 950mL，胰蛋白胨 10g，NaCl 10g，酵母提取物(bacto- yeast extract) 5g，用lmol/L NaOH (約l mL) 調節(jié)pH值至7.0，加雙蒸餾水至總體積為1L，121℃濕熱滅菌30min。
含氨芐青霉素LB培養(yǎng)基：待LB培養(yǎng)基滅菌后冷至50℃左右加入抗生素，至終濃度為80～100mg/L。
22.復紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠藤氏培養(yǎng)基)、(用于水體中大腸菌群測定)
蛋白胨 10g，牛肉浸膏 5g，酵母浸膏 5g，瓊脂 20g，乳糖 10g，K2HPO4 0.5g，無水亞硫酸鈉5g，5%堿性復紅乙醇溶液20mL，蒸餾水1000mL。
制作過程：先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中，加熱溶解，再加入K2PO4，溶解后補充水至1000mL，調pH至7.2～7.4。隨后加入乳糖，混勻溶解后，于115℃濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中，用少許無菌水使其溶解，在水浴中煮沸高效骨痛康管頸椎病嗎10min后，立即滴加于20mL 5%堿性復紅乙醇溶液中，直至深紅色轉變?yōu)榈奂t色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養(yǎng)基中，混勻后立即倒平板，待凝固后存放冰箱備用，若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t，則不能再用。
23.乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基(用于水體中大腸菌群測定)
蛋白胨 10g，牛肉浸膏 5g，酵母膏 5g，乳糖 10g，瓊脂 5g，蒸餾水 1000mL，pH7.2～7.4，分裝試管(l0mL/管)，115℃濕熱滅菌20min。
24.乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群)
蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖 5g，NaCl 5g，蒸餾水 1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL。調pH至7.2，分裝試管(10mL/管)，并放入倒置杜氏小管，15℃濕熱滅菌20min。
25.三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測定)
將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營養(yǎng)成分以擴大3倍加入到 1000mL水中，制法同上，分裝于放有倒置杜氏小管的試管中，每管5mL，15℃濕熱滅菌 20min。
26.伊紅美藍培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測定和細菌轉導)
蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 2g，瓊脂 25g，2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL，0.5%美藍(亞甲藍)水溶液 3mL，pH7.4。
制作過程：先將蛋白胨、乳糖、K2HPO4和瓊脂混勻，加熱溶解后，調pH至7.4，15℃濕熱滅菌20min，然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液，充分混勻，防止產生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會產生過多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉導實驗中用半乳糖代替乳糖，其余成分不變。
27.加倍肉湯培養(yǎng)基(用于細菌轉導)
牛肉膏 6g，蛋白胨 20g，NaCl 10g，水 1000mL，pH7.4～7.6。
28.半固體素瓊脂(用于細菌轉導)瓊脂 1g，水 100mL，121℃濕熱滅菌30min。
29.豆餅斜面培養(yǎng)基(用于產蛋白酶霉菌菌株篩選)
豆餅 100g 加水5～6倍，煮出濾汁 100mL，汁內加入KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，(NH4)2SO4 0.05%，可溶性淀粉2%，pH6，瓊脂2%～2.5%。
30.酪素培養(yǎng)基(用32.YEPD培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)
酵母粉 10g，蛋白胨 20g，葡萄糖 20g，蒸餾水 1000mL，pH6.0，115℃濕熱滅菌20min。
33.YEPD高滲培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)
在YEPD培養(yǎng)基中加入0.6 mol/L 的 NaCL，3%瓊脂。
34.YNB基本培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)
0.67%酵母氮堿基(YNB, 不含氨基酸，Difco)，2%葡萄糖，3%瓊脂，pH6.2。
另一配方為：葡萄糖10g(NH4)2SO4 1g，K2HPO4 0.125g，KHPO4 0.875g，KI 0.0001g，MgSO4?7H2O 0.5g，CaCl2?2H2O 0.1g，NaCl 0.1g，維量元素母液 1mL，維生素母液 1mL(母液均按常規(guī)配制)，水1000mL，pH5.8～6.0。
35.YNB高滲基本培養(yǎng)基(用于原生質體融合)
在YNB基本培養(yǎng)基中加入0.6 mol/L NaCl。
36.酚紅半固體柱狀培養(yǎng)基(用于檢查氧與菌生長的關系)
蛋白胨 1g，葡萄糖 10g, 玉米漿 10g，瓊脂 7g，水 1000mL，pH7.2。在調好pH后，加入1.6%酚紅溶液數(shù)滴，至培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色，分裝于大試管中，裝量約為試管高度的1/2，15℃滅菌20min。細菌在此培養(yǎng)基中利用葡萄糖生長產酸，使酚紅從紅色變成黃色，在不同部位生長的細菌，可使培養(yǎng)基的相應部位顏色改變,但注意培養(yǎng)時間太長，酸可擴散以致不能正確判斷結果。
以上各種培養(yǎng)基均可配制成固體或半固體狀態(tài)，只需改變瓊脂用量即可，前者為1.5%～2.0%，后者為0.3%～0.8%。
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